第四章 药物定量分析与分析方法验证

4.1定量分析样品的前处理方法

⑴存在形式：①含金属的有机药物：金属原子不直接与碳原子相连，通常为有机酸或酚类的金属盐或配位化合物；②有机金属药物：金属盐子直接与碳原子以共价键相连。

⑵分类：①不经有机破坏的分析方法：a.直接测定法：i.配位滴定法(葡萄糖酸钙用乙二胺四乙酸二钠滴定)；ii.氧化还原滴定法(富马酸亚铁)；b.经水解后测定法：i.碱水解(含卤素：三氯叔丁醇)；ii.酸水解(十一烯酸锌)；c.经还原分解后测定法(含碘：泛影酸、胆影酸、碘他拉酸)；②经有机破坏的分析方法：a.湿法破坏(凯氏定氮法：扑米酮)；b.干法破坏：i.高温炽灼法；ii.氧瓶燃烧法(碘苯酯)

⑶氧瓶燃烧法

①原理：将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为二氧化碳和水，而待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液，再根据其性质和存在形式采用适宜方法分析。

②器具：磨口、硬质玻璃锥形瓶

③注意事项：p84

4.2定量分析方法的特点

⑴容量分析法——计算p87★★★：是将已知浓度的滴定液由滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反应完全，然后根据滴定液的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系计算出被测药物的含量。

①滴定度：每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量。

②滴定度的计算：T(mg/ml)=m×a/b×M；m滴定液摩尔浓度mol/L、a被测药物摩尔数、b滴定剂摩尔数、M被测药物毫摩尔含量mg。

⑵紫外测定法

①对照品比较法②吸收系数法③计算分光光度法：双波长分光光度法p93★④比色法

⑶色谱分析法——HPLC系统适用性试验p95★

①色谱柱的理论板数n=5.54(tR/Wh/2)2

②分离度R=2(tR1- tR2)/(W1+W2)

③重复性

④拖尾因子T= W0.05h/2d1（峰高法定量时T应在0.95-1.05间；拖尾峰T>1，对称峰T=1，前沿峰T<1）
 

4.3药品分析方法的验证p98★

目的是证明采用的方法适合于相应检测要求，方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草或修订说明中。

⑴准确度：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。

⑵精密度：指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度，可用偏差d、标准偏差SD、相对标准偏差PSD表示。定量测定

①重复性：同一分析人员②中间精密度：同一实验室不同时间不同人员不同设备（③重现性：不同实验室

⑶专属性：指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别、杂质检查、含量测定

⑷检测限（LOD）：指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量。反映方法是否具备足够的灵敏度。鉴别、杂质检查

①目视法②信噪比法：S/N=3（或2）

⑸定量限（LOQ）：指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。定量测定    信噪比法：S/N=10

⑹线性：指在设计的“范围”内，测试结果（响应值）与试样中被测物的浓度或量直接呈正比关系的程度。相关系数r、最小二乘法

⑺范围：指能达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限浓度或量的区间。

⑻耐用性：指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法可用于常规检验提供依据。

⑼总结：

①非定量分析方法：如鉴别、杂质的限度检查，需专属性、检测限、耐用性。

②定量分析方法：如含量测定、含量均匀度、溶出释放度测定，需准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性。

③微量定量分析方法：如杂质的定量测定，需准确度、精密度、专属性、定量限、线性、范围、耐用性。

4.4生物样品分析方法的基本要求

⑴常用样品的种类、采集和贮藏

①血样：短期保存用4度冰箱，长期保存用-20度或-80度冷藏。

①血浆：采集血样置含抗凝剂试管中，混匀，离心，取上清液②血清：采集血样室温放置0.5-1小时，待凝固后剥离血饼，离心，取上清液③全血：也应加入抗凝剂混合

②唾液：4度以下保存

③尿液：保存需加入防腐剂（甲苯、二甲苯等），以免因细菌繁殖而变混浊。

⑵生物样品分析前处理技术

蛋白质的去除：①加入与水混溶的有机溶剂②加入中性盐③加入强酸④加入含锌盐及铜盐的沉淀剂⑤酶解法